为了解决肿瘤抗原逃逸问题，研究人员之前开发了一种串联的双特异性CAR20-19结构，该结构同时靶向CD19和CD20抗原，并在一期临床试验中显示出良好疗效和耐受性。多特异性CAR-T细胞被认为可以减少肿瘤抗原逃逸并改善治疗效果。

随着以CD19和CD22为靶点的嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor, CAR）-T细胞疗法（CAR-T疗法）的出现，B细胞白血病和淋巴瘤的治疗有了明显改善。然而，CAR-T治疗后复发问题一直没有解决，在所有接受CAR19 T细胞治疗的患者中，多达50%的患者在治疗一年内复发，其中相当一部分患者表现出CD19抗原丢失。同样，CAR22 T细胞治疗B细胞急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia, ALL）的复发与CD22在恶性肿瘤中的表达下调有关。

为了解决肿瘤抗原逃逸问题，研究人员之前开发了一种串联的双特异性CAR20-19结构，该结构同时靶向CD19和CD20抗原，并在一期临床试验中显示出良好疗效和耐受性。多特异性CAR-T细胞被认为可以减少肿瘤抗原逃逸并改善治疗效果。美国Lentigen公司的Dina Schneider等研究人员假设B细胞肿瘤抗原逃逸可以通过同时靶向三种B细胞白血病抗原的CAR设计来克服。

研究人员利用慢病毒载体构建了三特异性duoCAR-T细胞，该慢病毒载体编码两个靶向CD19、CD20和CD22的CAR开放阅读框。duoCAR由一个串联的CAR20-19通过P2A自切割肽与靶向CD22的CAR连接，产生三特异性结构。CAR共刺激结构在CAR-T细胞功能中发挥重要作用。使用了ICOS、OX40或CD27作为共刺激信号，研究人员最终筛选出四种duoCAR结构。其中，最有效的duoCAR结构包括ICOS、OX40或CD27信号域，而不是CD28或4-1BB。

体外实验发现，duoCAR-T细胞能够稳定分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF和IL-9等多种细胞因子，最终杀死肿瘤细胞。在小鼠体内实验中，duoCAR-T疗法可以有效地抑制异种移植的白血病和淋巴瘤肿瘤。此外，在携带三阳性（CD19/20/22阳性）、CD19 阴性、CD20 阴性和CD22阴性的B细胞淋巴瘤的小鼠中，只有duoCAR-T细胞能快速有效地消除肿瘤，而每种monoCAR-T细胞（单抗原）均未能阻止肿瘤的进展。

该研究结果表明，三特异性duoCAR-T细胞可用于预防由B细胞恶性肿瘤患者抗原丢失或表达下调引起的复发，同时有助于解决抗原异质性问题。

参考文献：Schneider D, XIONG Ying, WU Da-rong, et al. Trispecific CD19-CD20-CD22–targeting duoCAR-T cells eliminate antigen-heterogeneous B cell tumors in preclinical models[J]. Science Translational Medicine,2021,13:eabc6401.